熒光標(biāo)記氧化型低密度脂蛋白是血漿中的主要膽固醇運(yùn)輸顆粒重要的，其在某些條件下被氧化修飾后形成的Ox-LDL在動(dòng)脈粥樣硬化等心血管疾病的發(fā)生發(fā)展中起著重要作用探討。為了研究LDL在病理和生理過(guò)程中的作用勇探新路，科學(xué)家們開(kāi)發(fā)了多種標(biāo)記方法長遠所需，以便在細(xì)胞和分子層面進(jìn)行追蹤形式。
首先，LDL的提取是制備的第一步非常完善。從人血漿中分離出來(lái)的LDL通過(guò)一系列的離心和沉淀步驟得到純化傳遞。得到的LDL需要在含10μMCuSO4的PBS溶液中進(jìn)行氧化反應(yīng)。銅離子作為氧化催化劑非常重要，推動(dòng)脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)的進(jìn)行實事求是。此過(guò)程中，LDL中的多不飽和脂肪酸（PUFAs）被氧化行動力，形成一系列復(fù)雜的氧化產(chǎn)物結構，包括丙二醛（MDA）和4-羥烯酸（4-HNE）。這些物質(zhì)進(jìn)一步與ApoB-100結(jié)合落到實處，形成希夫氏堿效果，從而改變LDL的結(jié)構(gòu)和功能特性。
接下來(lái)是進(jìn)行熒光標(biāo)記營造一處。常用的熒光標(biāo)記物為DiI服務水平，這種標(biāo)記物可以與LDL顆粒結(jié)合，不影響其生化特性保供。將DiI與已氧化的LDL孵育能力建設，通過(guò)疏水作用使DiI嵌入LDL顆粒的脂質(zhì)核心中。經(jīng)過(guò)適當(dāng)?shù)姆跤龝r(shí)間后技術創新，未結(jié)合的DiI通過(guò)透析或凝膠過(guò)濾去除醒悟，最終獲得熒光標(biāo)記的氧化型低密度脂蛋白，即DiI-Ox-LDL生產體系。
最后是熒光標(biāo)記氧化型低密度脂蛋白的注意事項(xiàng)與應(yīng)用領(lǐng)域新模式。在整個(gè)過(guò)程中，需要嚴(yán)格控制實(shí)驗(yàn)條件高質量，如溫度應用情況、pH值和反應(yīng)時(shí)間，以確保熒光探針的有效結(jié)合并且保持Ox-LDL的生物活性。制備后的DiI-Ox-LDL通常在4℃避光保存也逐步提升，且不可凍結(jié)。該標(biāo)記脂蛋白廣泛用于研究脂質(zhì)代謝參與水平、受體介導(dǎo)的內(nèi)吞作用以及動(dòng)脈粥樣硬化機(jī)制真諦所在。
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