CCK8細胞增殖毒性檢測試劑盒的使用要求主要包括以下幾個方面:
1.細胞接種
細胞數(shù)量:通常細胞增殖實驗每孔加入約2000個細胞智能化,細胞毒性實驗每孔加入5000~10000個細胞左右。具體數(shù)量需根據(jù)細胞的大小協調機製、細胞增殖速度等決定標準。
培養(yǎng)時間:一般建議貼壁生長24小時,讓細胞充分貼壁且生長狀態(tài)穩(wěn)定領先水平,便于后續(xù)實驗操作與結(jié)果分析。
接種混勻:接種時注意細胞懸液一定要混勻,避免細胞沉淀導(dǎo)致每孔中的細胞數(shù)量不等戰略布局¢L遠所需?梢悦拷臃N數(shù)孔即混勻一下,確保細胞分布均勻讓人糾結。
2.藥物處理
設(shè)置對照:需設(shè)置空白組和對照組,空白組不加細胞只加培養(yǎng)基穩定發展,用于扣除本底OD值基石之一;對照組加入細胞和培養(yǎng)基但不添加藥物,用于對比藥物處理組的細胞存活情況增持能力。
藥物濃度與體積:根據(jù)實驗?zāi)康暮图毎匦怨餐?,配制不同濃度的藥物溶液,并按一定體積加入到相應(yīng)的細胞孔中影響,如每孔加入10μL不同濃度的藥物刺激液新的動力。
3.孵育條件
溫度:一般哺乳動物細胞建議在37°C下進行孵育的過程中,其他種屬的細胞可根據(jù)其特定的細胞培養(yǎng)條件選擇合適的溫度。
氣體環(huán)境:需在含5% CO?空氣及濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育廣泛關註,以維持細胞的正常生長環(huán)境促進進步。
孵育時間:根據(jù)不同實驗細胞需求選擇適當?shù)姆跤龡l件和時間。例如優勢領先,加藥后的孵育時間可設(shè)置時間梯度迎來新的篇章,通過觀察數(shù)據(jù)的穩(wěn)定性(RSD)、OD值的范圍(一般在1.0左右)等來選擇孵育時間推動並實現。
4.CCK8試劑添加
添加時機:在藥物孵育結(jié)束后薄弱點,向每孔中加入適量的CCK-8溶液,一般為10μL優化程度。注意不要在一開始就加入CCK-8積極性,否則會影響藥物的作用效果和檢測結(jié)果的準確性。
試劑用量:按照說明書的體系加入合適的CCK-8含量不斷豐富。如果細胞體系較大實施體系,可適當增加CCK-8的量,但要注意避免試劑過量或不足影響檢測結(jié)果創新的技術。
5.CCK8細胞增殖毒性檢測試劑盒吸光度測定
測定波長:使用酶標儀在450nm處測定吸光度發揮,此波長是CCK-8試劑檢測的適宜波長。
測定時間:在加入CCK-8試劑后快速增長,需再次孵育一段時間再進行吸光度測定開放以來。對于不同的細胞類型,孵育時間有所不同高質量,如白細胞較難顯色提供了有力支撐,可能需要較長的CCK-8反應(yīng)時間或增加細胞數(shù)量;懸浮細胞與貼壁細胞相比也較難顯色前景,孵育時間一般為1-4小時進一步意見,多數(shù)細胞在培養(yǎng)30分鐘左右即可肉眼觀察到明顯的顯色反應(yīng),培養(yǎng)3.5-4小時左右檢測效果佳共享應用。
6.結(jié)果計算與分析
細胞存活率計算:細胞存活率=(實驗孔OD值-空白孔OD值)/(對照孔OD值-空白孔OD值)×100%生產能力,通過該公式計算出各組細胞的存活率,從而評估藥物對細胞的增殖或毒性影響示範推廣。
數(shù)據(jù)分析:盡量多設(shè)置復(fù)孔處理方法,取平均值以減少誤差。同時持續向好,可通過繪制細胞存活率曲線等方式直觀地展示藥物濃度與細胞存活率之間的關(guān)系習慣。
